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1. 大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。在表达重组蛋白后用超声波细胞破碎仪破碎细胞，采用冰浴，400w，破碎2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，zui后都是破碎不完全，而目的蛋白就在这些未破碎的细胞中，怎么办？

解析：会产生气泡是因为探头位置没放好；探头一定要接近底部，约0.5-1cm；功率根据仪器不同会有所不同，但可以观察液面，有波动但不要太剧烈；可以选择超声波细胞破碎仪破碎3s停10s，破碎20-30次；变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整；从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积，强度zui好不要超过60%；尝试破碎8s停8s，对有些菌体蛋白来说，难散热导致蛋白变性产生气泡，可以停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。

2. 链霉菌（放线菌）超声破碎条件是什么？

解析：放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，破碎5s停5s的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，由于细胞壁组成差异一般没什么效果。 链霉菌（放线菌）超声破碎前处理一般是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声波细胞破碎仪破碎时采用的具体条件是：取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体；用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液。置于40 mL大塑料试管内；将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波细胞破碎仪破碎（功率200W，1／2”探头，破碎30s，间歇30s）；破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜。洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，破碎5s，停5s，冰浴，要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。